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細(xì)胞培養(yǎng)知識|懸浮細(xì)胞
2023.08.01   點(diǎn)擊12904次

實(shí)驗(yàn)室里培養(yǎng)的細(xì)胞一般可以簡單地分為兩大類,貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。貼壁細(xì)胞(adherent cells)指的是這類生長必須有可以貼附的支持物表面,只有依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長、繁殖的細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞在該表面生長后,一般會形成兩種形態(tài),即成纖維樣細(xì)胞或者上皮樣細(xì)胞。而另一類則是細(xì)胞生長不依賴支持物表面,在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長,這類細(xì)胞我們稱之為懸浮細(xì)胞。懸浮細(xì)胞在顯微鏡下觀察,一般是單個生長的大小均一的圓圓的、亮亮的形態(tài)規(guī)則的細(xì)胞形態(tài),也有部分細(xì)胞聚集,成團(tuán)生長。

然而實(shí)際上貼壁生長的細(xì)胞與懸浮生長的細(xì)胞都有很多種。當(dāng)活體體內(nèi)的細(xì)胞離體置于體外培養(yǎng)時大多數(shù)均以貼壁方式生長,主要包括一些正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞,比如成纖維細(xì)胞,骨骼組織(骨及軟骨),心肌與平滑肌、肝、肺、腎、乳腺皮膚神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,內(nèi)分泌細(xì)胞,黑色素細(xì)胞以及各種腫瘤細(xì)胞等。少數(shù)細(xì)胞在體外培養(yǎng)時則是懸浮生長,包括一些取自血、脾或骨髓的培養(yǎng)細(xì)胞,尤其是血液白細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞等。

從懸浮細(xì)胞的定義上來說,懸浮細(xì)胞是不貼壁的,懸浮生長的細(xì)胞,所以由此可知懸浮細(xì)胞不需要酶的作用就可以使其從培養(yǎng)容器表面脫離,故懸浮細(xì)胞傳代培養(yǎng)的方法較為簡單。一般實(shí)驗(yàn)室中常用直接傳代法和離心傳代法(在發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞碎片的情況下)來處理懸浮細(xì)胞。當(dāng)觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至 80%~90%(細(xì)胞懸液變黃)的時候,細(xì)胞就可以進(jìn)行傳代操作了。

從顯微鏡下觀察,如果細(xì)胞狀態(tài)良好(基本無細(xì)胞碎片,細(xì)胞形態(tài)規(guī)則)時,則可以選擇直接傳代法。將原瓶中的培養(yǎng)基按比例(具體比例視實(shí)驗(yàn)而定,但是不能太稀,太稀細(xì)胞長不起來)分裝到新的培養(yǎng)瓶中,然后補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基(補(bǔ)加的培養(yǎng)基量不能太大,否則會導(dǎo)致細(xì)胞因?yàn)槊芏冗^低而養(yǎng)不起來),然后隔天觀察細(xì)胞密度來考慮是否需要補(bǔ)液。

如果從顯微鏡下觀察,細(xì)胞狀態(tài)較差時(細(xì)胞碎片較多,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則)時,則需要使用離心傳代法。首先,要將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),離心機(jī)1000rpm離心 5 min;然后棄去上層清液,輕輕地將細(xì)胞沉淀彈散(盡量不用吹打,會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不好甚至死亡),使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;最后用吸管吸取適量細(xì)胞懸液,裝入新的培養(yǎng)瓶,再加入適量的新鮮培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。

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